Клонирование и анализ генов легких цепей иммуноглобулинов стерляди

          Êîñòèñòûå ðûáû.

          Àíàëèç ñûâîðîòî÷íûõ àíòèòåë ïåùåðíîãî ñîìèêà (Ictalurus punctatus) ïîêàçàë íàëè÷èå òðåõ òèïîâ L-öåïåé ñ ðàçëè÷íûìè ìîëåêóëÿðíûìè ìàññàìè: 26, 24 è 22 êÄà. Äâà âèäà àíòèòåë ìûøè, 3F12 è 1G7, çàõâàòûâàþò áîëåå 90% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà èììóíîãëîáóëèíîâ â ðåàêöèè èììóíîïðåöèïèòàöèè. Ïðè ýòîì 3F12 àíòèòåëà ñâÿçûâàþòñÿ ñ ìîëåêóëàìè, ñîäåðæàùèìè L-öåïè ìàññîé 24 è 22 êÄà, à 1G3 àíòèòåëà ñ äðóãîé ñóáïîïóëÿöèåé, ñîäåðæàùåé L-öåïè ìàññîé 26 êÄà. Íà îñíîâå ýòèõ äàííûõ L-öåïè ðàçäåëÿþò íà äâà êëàññà, íàçûâàåìûå F è G (Lobb et al.,1984).

          Ãåíîìíàÿ îðãàíèçàöèÿ ëîêóñà L-öåïåé G òèïà èìååò êëàñòåðíûé òèï (ðèñ. 5). Â êàæäîì êëàñòåðå ñîäåðæèòñÿ ïî îäíîìó J è C ñåãìåíòó è äâà V ñåãìåíà. Âàðèàáåëüíûå ãåííûå ñåãìåíòû ðàñïîëîæåíû âñåãäà â ïðîòèâîïîëîæíîé òðàíñêðèïöèîííîé ïîëÿðíîñòè ê J è C ñåãìåíòàì . Â ðÿäå ãåíîìíûõ êëîíîâ îäèí V ñåãìåíò ðàñïîëàãàëñÿ ñ 3' ñòîðîíû îò C ãåííîãî ñåãìåíòà. Ðàçìåð êëàñòåðà ðàâåí ïðèìåðíî 3 òïí, ðàññòîÿíèå ìåæäó êëàñòåðàìè îêîëî 6 òïí (Ghaffari and Lobb, 1993; Bengten, 1994).

          Õîòÿ ãåíû L-öåïåé ñîìèêà èìåþò íèçêóþ ãîìîëîãèþ ñ ãåíàìè äðóãèõ ïîçâîíî÷íûõ (40-50% ïî íóêëåîòèäíîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè), èõ ìîæíî îòíåñòè ê êàïïà òèïó âûñøèõ ïîçâîíî÷íûõ, òàê êàê ñõîäñòâî ïî ïåðâè÷íîé ñòðóêòóðå ñ ëÿìáäà òèïîì íèæå. Êðîìå òîãî, êîíôèãóðàöèÿ ñïåéñåðîâ èìååò õàðàêòåð êàïïà òèïà: 12 ïí ñïåéñåð àññîöèèðîâàí ñ V, 23 ïí ñïåéñåð ñ J ñåãìåíòîì (Ghaffari and Lobb, 1993).

          Ó ðàäóæíîé ôîðåëè (Oncorhynchus mykiss), ïðåäñòàâèòåëÿ äðóãîãî ñåìåéñòâà êîñòèñòûõ ðûá, òàêæå îáíàðóæåíû äâà òèïà L öåïåé (Daggfeldt et al., 1993). Îäèí èç íèõ (L1) âûñîêîãîìîëîãè÷åí G òèïó ñîìèêà ïî ñòðóêòóðå V è C îáëàñòåé è ñîîòâåòñòâóþùèé ëîêóñ èìååò ñõîäíóþ îðãàíèçàöèþ.

          Ïî-âèäèìîìó, ó ýòèõ âèäîâ îáúåäèíåíèå V è J ñåãìåíòîâ ïðîèñõîäèò òîëüêî çà ñ÷åò èíâåðñèé ñ âîññòàíîâëåíèåì åäèíîé ïîëÿðíîñòè òðàíñêðèïöèè. Ðàçíîîáðàçèå âàðèàáåëüíûõ äîìåíîâ îáðàçóåòñÿ â ðåçóëüòàòå êîìáèíàòèâíîãî ñî÷åòàíèÿ V è J ñåãìåíòîâ â ïðåäåëàõ îäíîãî êëàñòåðà. Íå èñêëþ÷àåòñÿ, ÷òî â ïåðåñòðîéêè ìîãóò âîâëåêàòüñÿ è ñîñåäíèå êëàñòåðû.

          Èíòåðåñíîé îñîáåííîñòüþ êîñòèñòûõ ðûá ÿâëÿåòñÿ î÷åíü âûñîêàÿ ïðîïîðöèÿ ìÐÍÊ, ïðåäñòàâëÿþùåé òàê íàçûâàåìûå ñòåðèëüíûå òðàíñêðèïòû (Ghaffari and Lobb, 1993). Ýòè òðàíñêðèïòû âêëþ÷àþò â ñåáÿ òîëüêî Ñ-ñåãìåíòû è ôëàíêèðóþùèå èõ 5’è 3’-íåòðàíñëèðóåìûå ó÷àñòêè. Êîëè÷åñòâî ñòåðèëüíûõ òðàíñêðèïòîâ ó ñîìèêà è ôîðåëè â 5 ðàç ïðåâûøàåò êîëè÷åñòâî ïîëíûõ VJC-òðàíñêðèïòîâ.

          Ðèñ. 5. Ãåíîìíàÿ îðãàíèçàöèÿ ëîêóñà ãåíîâ L-öåïåé ÈÃ ó ïåùåðíîãî ñîìèêà.

          Ãåííûå ñåãìåíòû îðãàíèçîâàíû â êëàñòåðû. Êàæäûé êëàñòåð ñîäåðæèò äâà VL è ïî îäíîìó JL è CL ñåãìåíòó è èìååò ðàçìåð îêîëî 5 òïí. Ðàññòîÿíèå ìåæäó JL è CL îêîëî 1000 ïí, VL ñåãìåíòû óäàëåíû îò 5' êîíöà JL ñåãìåíòà íà 3 òïí. VL ñåãìåíòû âñåãäà ðàñïîëîæåíû â ïðîòèâîïîëîæíîé òðàíñêðèïöèîííîé ïîëÿðíîñòè ïî îòíîøåíèþ JL è CL ñåãìåíòàì (Ghaffari and Lobb, 1993).

          Àìôèáèè.

          Ó øïîðöåâîé ëÿãóøêè (Xenopus laevis) âûÿâëåíî òðè ñåìåéñòâà ãåíîâ L-öåïåé ÈÃ, êîäèðóþùèõ òðè ðàçëè÷íûõ èçîòèïà: L1 (ðî), L2 (ñèãìà) è L3 (ðèñ. 6).

          Âñå òðè ëîêóñà èìåþò ñåãìåíòàðíûé õàðàêòåð îðãàíèçàöèè. L1 ëîêóñ ñîäåðæèò ìíîæåñòâåííûå VL1 ñåãìåíòû, ðàçäåëåííûå â ãåíîìå 2.1 - 3.6 òïí, ïÿòü JL1 ñåãìåíòîâ, òðè èç êîòîðûõ èäåíòè÷íû, è îäèí CL1 ãåííûé ñåãìåíò (Stewart et al., 1993). JL1 è VL1 ñåãìåíòû ôëàíêèðóþòñÿ êàíîíè÷åñêèìè ãåïòà- è íîíàìåðíûìè ñèãíàëüíûìè ïîñëåäîâàòåëüíîñòÿìè, ðàçäåëåííûìè 12 ïí ó VL1 è 23 ïí ó JL1 ñåãìåíòîâ (Sakano et al., 1980).

          Ëîêóñ ãåíîâ âòîðîãî òèïà ðàçäåëÿåòñÿ íà äâà ñåìåéñòâà, s1 è s2, êîòîðûå â ãåíîìå ðàñïîëàãàþòñÿ îòäåëüíî. Ãåíîì ëÿãóøêè ñîäåðæèò ìíîæåñòâåííûå Vs1 è íåñêîëüêî Vs2 ãåíûõ ñåãìåíòîâ, îäíó ïàðó Js1-Cs1 è ïàðó Js2-Cs2 (Schwager et al., 1991). Ðàñïîëîæåíèå ãåíîâ ýòîãî òèïà äðóã îòíîñèòåëüíî äðóãà òî÷íî íå îïðåäåëåíî.

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17